人生就是博-尊龙凯时致力于推动生物医疗研究，以下是人小胶质细胞HMC3的培养说明书，供研究人员参考。
一、细胞培养条件
细胞名称：人小胶质细胞HMC3
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM+10%FBS+1%P/S
传代方法：第一次建议1:2传代，传代情况2天换液。备注：请使用无菌离心管收集瓶中的培养基，以备对比培养。如果对比效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。
二、细胞收到后的处理
细胞收到后，请将其培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口。这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台内，严格执行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。显微镜观察细胞生长情况，并拍照记录不同倍数（最好40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，如果未提供照片默认状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另外一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后请将瓶盖拧松。
三、细胞培养步骤
a. 细胞传代
如果未超过80%汇合度，将瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基放入37℃、5%CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：
- 弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，随后在显微镜下观察细胞消化情况。当细胞大部分变圆并脱落时，迅速将其取回，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
- 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重新悬浮。
- 将细胞悬液以1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
b. 细胞冻存
- 细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后立即加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使其脱落，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
- 弃去上清，沉淀细胞加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
- 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，请在-80℃冰箱中存放24小时以上后再做转移。
c. 细胞复苏
- 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速放置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
- 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
- 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃, 5%CO2细胞培养箱中培养。
- 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
四、注意事项
某些细胞粘附不牢，在运输过程中可能会发生细胞脱落，属于正常现象。如脱离较多，请将培养瓶中的培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀中加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，再离心，弃上清，加入1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃, 5%CO2细胞培养箱中培养。
五、售后条款
- 细胞问题重发情况：
- 细胞在运输途中遭遇的各种问题，如丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，属于重发情况。
- 如收到细胞污染，请在48小时内提供真实实验结果，核实后可重发。
- 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏24小时后大多数未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发。
- 常温发货的细胞在静置4小时未开封且出现污染，重发。
- 如细胞活性问题，请在7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法检测活力，核实后可重发。
- 收到细胞当天及第2、3天拍照，若3天未告知，视为产品合格。
- 4-7天内出现问题需提供前三天照片，以及详细操作步骤，经过技术人员确认责任方进行重发。
- 不予重发的情况：
- 客户造成的细胞污染，不重发。
- 客户不当操作导致细胞状态不佳，不重发。
- 非推荐培养体系导致细胞状态不良，不重发。
- 未提供细胞培养前3天照片的，视为不重发。
- 细胞培养时经其他处理的，不重发。
- 细胞在收到2天内未告知问题的，不重发。
- 视具体情况而定。
选择人生就是博-尊龙凯时的细胞产品，您将获得高品质的科研支持与售后服务！
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