人生就是博-尊龙凯时细胞培养指导手册

一、细胞培养条件

细胞名称：生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640 + 10%FBS + 1%P/S + 1%丙酮酸钠 + 1%L-谷氨酰胺

传代方法：首次建议以1:2的比例进行传代，传代情况需在2天内更换培养基。

备注：请使用无菌离心管收集培养基以便于过渡对比培养，若对比效果不佳，我们建议直接购买我司的完整培养基。

二、细胞接收与处理

细胞收到后应立即培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳方式。收到细胞时，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后在超净台中进行严格的无菌操作。将细胞瓶放置在37℃、5%CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后进行后续处理。使用显微镜观察细胞的生长情况，并对细胞进行不同倍率拍照保存（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为重要售后依据，若未提供照片则默认为细胞状态良好。

经过传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶采用自配的完全培养基，以便进行对比研究，换液后请将瓶盖稍微松开。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：若细胞聚集度未超过80%，请将培养瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml的完全培养基并放入37℃，5%CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，即可轻敲培养瓶后迅速加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，去掉上清后用1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液以1:2的比例分瓶传代（即两个T25瓶），补充新完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存：细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶内液体并用PBS洗一次；接着，添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察至细胞收缩变圆后，再加入5ml完全培养液以终止消化。轻轻吹打细胞使其完全脱落后，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；弃去上清后，加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀并装入冻存管中。将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱存放超过24小时后再转入。

细胞复苏：从液氮取出细胞冻存管（注意佩戴防护装备），迅速放入37℃水浴中解冻，直至管内无结晶。然后用75%酒精擦拭冻存管外壁，接着将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；弃去上清后，用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶，放置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培育；第二天更换为新鲜的完全培养基进行持续培养。

注意事项：某些细胞贴壁能力较差，在运输中可能会脱落，这是正常现象。如果脱落较多，可以将培养瓶内所有液体收集至离心管，留作对比培养，沉淀后加入胰酶并在培养箱中培养。

四、售后条款

1）细胞出现问题，可能重发的情况及判定标准：

1. 细胞运输期间发生的各种问题，如细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液，均可重发；
2. 细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发；
3. 常温发货的细胞静置24小时或干冰发货的细胞复苏后24小时内，若大多数细胞未存活（需提供真实细胞状态照片），可重发；
4. 干冰发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时未开封出现污染，将重发；
5. 细胞活性问题，需在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法检测细胞活力，核实后可重发；
6. 在收到细胞当天及第2、3天请拍照，如3天未告知，则视为产品合格。若4-7天内出现问题，并提供前3天及出现问题时的照片和详细操作步骤，经过技术人员核实如属于我方责任则重发；如属双方责任，则由双方协商处理或按合同价的50%收费重发。

2）不予重发的情况：

1. 客户自身造成的细胞污染，不予重发；
2. 因客户不正确操作导致的细胞状态不佳，不予重发；
3. 非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不佳，不予重发；
4. 细胞状态不佳且未提供培养前3天的照片，不予重发；
5. 细胞培养过程经其他处理的，不予重发；
6. 收到细胞2天内未告知的问题，不予重发；
7. 视具体情况而定。

选择人生就是博-尊龙凯时，让您的细胞培养更为便捷高效！