## 产品及特点

本产品是根据探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，专为生物医疗领域量身定制，具有以下特点：

1. 即开即用，用户只需提供样品DNA模板，方便快捷。

2. 引物等组分经过优化，灵敏度极高，确保检测的精准性。

3. 提供阳性对照，有助于区分假阴性样品，提升检测可靠性。

4. 特异性强，引物设计根据中间普雷沃菌DNA序列高度保守区，避免与其他生物样本DNA的交叉反应。

5. 既可用于定性检测，又可进行定量检测。在定量检测时，线性范围至少可达5个数量级。

6. 本产品容许进行50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应，经济实用。

7. 本产品仅供科研使用。

### 使用方法

一、DNA提取（样本制备区）

建议用户根据自选方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

注意：因阳性对照浓度较高，稀释操作应在独立区域进行，以预防样品和其他成分的污染。

1. 标记6个离心管，编号分别为7，6，5，4，3，2。

2. 用带芯枪头加入45μL DEPC-H2O。

3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，冰上保存。

4. 换枪头，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品，冰上保存。

5. 换枪头，在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品，冰上保存。

6. 重复上述操作，直至得到6个稀释度的标准曲线样品，冰上保存。若不需要制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制（试剂准备区）

若有N个待检样品，需准备N+2个qPCR管（N个待检样品+1个阴性对照+6个阳性对照），向各PCR管中加入相应成分（详见说明书，欢迎向我司索取）。

四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中各加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒，立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置在PCR扩增仪器样品槽中，进行扩增，扩增程序详见说明书，欢迎索取。

六、结果分析

1. 如制作标准曲线，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴绘制标准曲线，再通过待测样品的Ct值推算出样品DNA浓度的log值。

2. 如无标准曲线，按照以下标准判定结果：

- 阳性对照结果：Ct值<30，显示明显的指数增长，呈典型的S型曲线。

- 阴性对照结果：Ct值38或无Ct值，无明显指数增长期和平台期。

- 样本检测结果：Ct值<35，显示明显指数增长，表明检测到婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值38或无Ct值，表明未检测到婴儿利什曼虫，结果为阴性；Ct值在35-38范围，应进行复检，如再实验结果依然在35-38范围内，有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

### 运输及保存

产品需低温运输，保存于-20℃环境，保存期限为一年。阳性对照需单独放置，避免污染其他试剂。选择人生就是博-尊龙凯时的产品，确保实验准确可靠。